Shaanxi BLOOM Tech Co., Ltd. es uno de los fabricantes y proveedores más experimentados de proteinasa k en polvo cas 39450-01-6 en China. Bienvenido a la venta al por mayor de polvo de proteinasa k de alta calidad cas 39450-01-6 a la venta aquí desde nuestra fábrica. Buen servicio y precio razonable están disponibles.
Polvo de proteinasa Kes una serina proteasa altamente eficiente y no{0}}específica ampliamente utilizada en biología molecular y bioquímica, principalmente para degradar proteínas y eliminar proteínas contaminantes de preparaciones de ácidos nucleicos. Se deriva del hongo Engyodontium album (anteriormente Tritirachium album) y mantiene su actividad en un amplio rango de temperaturas (20-60 grados) y pH (4-12), incluso cuando se incuba en una solución que contiene SDS (0,5-1%) o urea (4M) en condiciones desnaturalizantes.
La enzima descompone eficientemente una amplia gama de proteínas, incluidas la RNasa y la DNasa, mediante la escisión de enlaces peptídicos (preferentemente hidrolizando el extremo carboxilo de los aminoácidos alifáticos/aromáticos) y, por lo tanto, se utiliza para la eliminación de nucleasas en la extracción de ADN/ARN para garantizar la integridad del ácido nucleico. Además, se utiliza comúnmente en digestión de tejidos (p. ej., muestras incluidas en parafina-), lisis celular y estudios proteómicos.
El polvo de proteinasa K generalmente se suministra en forma liofilizada, que es altamente estable (-20 grados para almacenamiento a largo plazo) y debe disolverse en un tampón (por ejemplo, Tris-HCl, EDTA) antes de su uso. Su actividad depende del Ca²⁺, pero los agentes quelantes como el EDTA sólo inhiben parcialmente la actividad enzimática. Es necesario evitar la autodegradación durante la manipulación y se recomienda la inactivación por calor a 65 grados. Debido a su potente capacidad hidrolizante de proteínas, se requiere una protección cuidadosa para evitar el contacto con la piel o las membranas mucosas.
Proteinasa k en polvo, también conocida como Proteinasa K o EC 3.4.21.14, es una serina proteasa aislada y purificada de Tritirachium album Limber. Desde su primer aislamiento por Wolfgang Ebeling et al. En 1974, la proteinasa K se ha utilizado ampliamente en bioquímica, biología molecular, medicina e industria debido a su alta actividad y amplia especificidad de sustrato.
Aplicaciones en Bioquímica y Biología Molecular
En el proceso de extracción de ADN y ARN, la función principal de la proteinasa K es degradar las proteínas unidas a los ácidos nucleicos, permitiendo que el ADN o ARN quede libre en solución para su posterior extracción y purificación. Debido a su estabilidad y alta actividad en agentes desnaturalizantes como la urea y el SDS, la proteinasa K se usa comúnmente para el aislamiento de plásmidos o ADN y ARN genómicos.
La proteinasa K puede inhibir la actividad de la ARNasa y proteger el ARN de la degradación.
1. Extracción de ADN y ARN
Extracción de ADN: la proteasa K puede hidrolizar histonas que se unen al ADN, permitiendo que el ADN se disocia en solución. Posteriormente, se eliminaron las impurezas mediante diversos métodos, como extracción con fenol cloroformo, precipitación con etanol, etc., y se recogió el ADN purificado.
Extracción de ARN: durante el proceso de extracción de ARN, las enzimas de ARN suelen estar presentes en el medio ambiente y el propio sistema de muestra también puede contener enzimas de ARN, lo que hace que el ARN sea muy susceptible a la degradación. Añadiendo una pequeña cantidad de
2. Tecnología de hibridación in situ
En la tecnología de hibridación in situ, la proteinasa K se usa comúnmente para el procesamiento previo a la hibridación para digerir las proteínas que rodean el ADN objetivo, aumentar la posibilidad de que la sonda se una al ácido nucleico objetivo y mejorar la señal de hibridación. Sin embargo, cabe señalar que cuando la concentración de proteinasa K es demasiado alta, el tiempo de digestión es demasiado largo o la temperatura de incubación es demasiado alta, puede causar daños a la estructura celular, lo que provoca el desprendimiento de secciones de tejido y la desaparición de los núcleos celulares, afectando así los resultados de la hibridación. Por tanto, en aplicaciones prácticas, es necesario controlar estrictamente la concentración y el tiempo de tratamiento de la proteinasa K.
3. Inactivación y desinfección de virus
La proteasa K, debido a su fuerte actividad proteolítica, se puede utilizar para la inactivación y desinfección de virus. Las investigaciones han demostrado que el tratamiento del agua pura y de las aguas residuales domésticas con una determinada concentración de proteinasa K puede inactivar eficazmente los virus. La proteasa K, como desinfectante que inactiva virus, puede reducir el daño potencial causado por los desinfectantes químicos oxidativos convencionales al cuerpo humano, y su producción y transporte son seguros sin contaminación ambiental irreversible.
4. Western blotting y electroforesis de pulsos
La proteasa K también se ha utilizado ampliamente en la preparación de ADN cromosómico para electroforesis pulsada, transferencia Western y otros experimentos. En los experimentos de transferencia Western, se puede utilizar la proteinasa K para eliminar proteínas no-específicas de la muestra, lo que mejora la especificidad y la sensibilidad de la transferencia. En experimentos de electroforesis por pulsos, la proteinasa K puede degradar las impurezas proteicas en muestras de ADN y mejorar la eficiencia de la electroforesis.
5. Detección e identificación de proteínas.
Proteinasa k en polvoTambién se puede utilizar para la detección e identificación de determinadas proteínas. Por ejemplo, en el estudio de la encefalopatía espongiforme transmisible (EET), la proteinasa K se puede utilizar para digerir proteínas en muestras de tejido cerebral y para identificar la presencia de proteínas priónicas mediante la detección de la resistencia de priones patógenos a la proteinasa K. Además, la proteinasa K también se puede utilizar para experimentos como determinar la localización de enzimas en las membranas celulares y eliminar proteínas catiónicas unidas a endotoxinas (como la lisozima y la ribonucleasa A).
Aplicaciones en Medicina e Industria
Uso clínico: La proteasa K tiene cierto valor medicinal en medicina. Por ejemplo, tratar la indigestión con proteasa gástrica, tratar la bronquitis con proteasa ácida, tratar la vasculitis con elastasa, etc. Además, la tripsina, la quimotripsina, etc. también se utilizan habitualmente para la purificación de heridas purulentas quirúrgicas y el tratamiento de adherencias serosas pleurales.
Detección y diagnóstico de virus: la proteasa K también tiene aplicaciones potenciales en la detección y diagnóstico de virus. Al digerir las proteínas de la muestra de virus y exponer el ácido nucleico del virus, resulta conveniente para pruebas posteriores de ácido nucleico.
2. Sector industrial
Industria del cuero: Protease K se utiliza en la industria del cuero para tratamientos de depilación y suavizado, lo que puede ahorrar tiempo y mejorar las condiciones de higiene laboral.
Industria textil: la proteasa K se puede utilizar en industrias textiles como el desgomado de la seda.
Industria alimentaria: la proteasa K se puede utilizar en la industria alimentaria para ablandar la carne, clarificar el alcohol, etc.
Detergente: El detergente para ropa con adición de enzimas es un producto nuevo en detergentes. El detergente para ropa que contiene proteasa alcalina puede eliminar las manchas de sangre y la suciedad de proteínas de la ropa. Pero al usarlo, tenga cuidado de no tocar la piel para evitar dañar la proteína de la superficie de la piel y provocar reacciones alérgicas como sarpullido y eccema.
El peso molecular de la proteinasa K es de aproximadamente 28900 daltons (28,9 kDa) y también hay informes bibliográficos de 29,3 kDa. Su secuencia de aminoácidos y su estructura espacial tridimensional-son muy similares a las de la subtilisina de la familia de las serina proteasas, pero también tiene algunas características únicas.
Estructura del enlace disulfuro: las moléculas de proteasa K contienen enlaces disulfuro, que aumentan su estabilidad y les permiten mantener la actividad en un amplio rango de pH y condiciones de alta temperatura.
Sitios de unión de Ca ² ⁺:Proteinasa k en polvoContiene dos sitios de unión de Ca ² ⁺ que, aunque están lejos del centro activo, son cruciales para mantener la actividad catalítica de la enzima. La eliminación de Ca ² ⁺ hará que la proteasa K pierda aproximadamente el 80% de su actividad, y la reintroducción de Ca ² ⁺ solo puede restaurar parcialmente su actividad.
Tríada catalítica: La proteasa K tiene una tríada catalítica Asp-His69-Ser224, que es una estructura clave para su actividad hidrolítica.
Mecanismo de acción
La proteasa K puede hidrolizar preferentemente enlaces éster y peptídico adyacentes al extremo C-de aminoácidos hidrofóbicos, aminoácidos que contienen azufre- y aminoácidos aromáticos, hidrolizando proteínas en péptidos cortos. Su mecanismo de acción incluye principalmente los siguientes pasos:
Unión de sustrato enzimático: después de mezclar la proteasa K con el sustrato, el sustrato se une al sitio activo de la enzima, formando un complejo de sustrato enzimático.
Reacción catalítica: bajo la acción del sitio activo, el enlace peptídico del sustrato se hidroliza para formar un producto separado de la enzima.
El fuerte efecto de degradación de la proteasa K la convierte en un reactivo clave en diversas reacciones bioquímicas, especialmente en los procesos de extracción de ADN y ARN. La proteasa K puede degradar eficazmente las proteínas unidas a los ácidos nucleicos, liberar ácidos nucleicos e inhibir la actividad de las nucleasas, reduciendo la degradación de los ácidos nucleicos durante la extracción.
Métodos de almacenamiento y uso.
1. Guardar método
La proteasa K debe almacenarse en un refrigerador a -20 grados para evitar la congelación y descongelación repetidas. Si la solución precipita, no se puede volver a utilizar. Al preparar polvo liofilizado-de proteinasa K, es necesario agregar un protector de liofilización-para mantener un alto nivel de contenido sólido. Sin embargo, la proteinasa K tiende a agregarse y formar precipitados en concentraciones de 20 mg/ml o superiores, lo que plantea un desafío importante para la liofilización con alto contenido de sólidos.
2. Instrucciones de uso
Cuando se utiliza proteinasa K, es necesario preparar una solución de concentración adecuada según los requisitos experimentales. Por lo general, la concentración de trabajo de proteinasa K es de 0,05 a 0,2 mg/ml. En los experimentos de extracción de ADN y ARN, la extracción de una muestra requiere aproximadamente 0,1 mg de proteinasa K. Para mejorar la eficiencia de la extracción de ácidos nucleicos, la dosis de proteinasa K se puede aumentar adecuadamente. Cuando se utiliza proteinasa K para hibridación in situ, transferencia Western y otros experimentos, es necesario controlar estrictamente su concentración y tiempo de procesamiento para evitar dañar la estructura celular.
Proteinasa k en polvo, como serina proteasa altamente activa y específica de sustrato, tiene una amplia gama de aplicaciones en bioquímica, biología molecular, medicina e industria. Puede degradar proteínas que se unen a ácidos nucleicos y liberar ácidos nucleicos; Aumentar la oportunidad de que las sondas se unan a los ácidos nucleicos diana en la tecnología de hibridación in situ; Utilizado para la inactivación y desinfección de virus; Elimine las impurezas de proteínas en experimentos de electroforesis de pulsos y transferencia Western; Tiene valor medicinal en el campo de la medicina; Se utiliza en campos industriales como el procesamiento del cuero, la industria textil, la industria alimentaria y la fabricación de detergentes. Sin embargo, cuando se utiliza proteinasa K, se debe prestar atención a su método de almacenamiento y condiciones de uso para garantizar su estabilidad y actividad.
reacción adversa
La proteinasa K es una serina proteasa de amplio-espectro ampliamente utilizada en los campos de la biología molecular, la bioquímica y la investigación médica debido a su estabilidad y propiedades enzimáticas únicas. En forma de polvo-liofilizado, la proteinasa K en polvo desempeña un papel crucial en experimentos como la extracción de ácidos nucleicos, la digestión de proteínas y la homogeneización de tejidos. Sin embargo, el uso de cualquier reactivo biológico conlleva riesgos potenciales y sus reacciones adversas pueden afectar la salud de los operadores y la seguridad del entorno experimental.
Reacción alérgica
Manifestaciones clínicas
La proteinasa K puede desencadenar reacciones de hipersensibilidad tipo I, con síntomas que incluyen:
Reacciones cutáneas: erupción cutánea, picazón, urticaria, eritema y, en casos graves, puede producirse edema vascular.
Síntomas respiratorios: tos, sibilancias, dificultad para respirar, puede desencadenar ataques de asma.
Síntomas sistémicos: mareos, opresión en el pecho, dolor en el pecho, dolor muscular, enrojecimiento y, en casos raros, puede producirse shock anafiláctico.
Mecanismo de ocurrencia
La proteinasa K, como proteína heteróloga, puede ser reconocida por el sistema inmunológico como un antígeno, estimulando a las células B para que produzcan anticuerpos IgE específicos. Cuando un individuo vuelve a entrar en contacto, la IgE se une a los receptores de la superficie de los mastocitos, provocando reacciones de desgranulación y liberando mediadores inflamatorios como la histamina y los leucotrienos, lo que provoca síntomas alérgicos.
Factores que influyen
Sensibilidad individual: la susceptibilidad genética y los antecedentes de alergias (como asma y eccema) aumentan el riesgo.
Ruta de exposición: Es más probable que la inhalación de partículas de polvo o el contacto directo con la piel causen alergias.
Dosis y frecuencia: el uso a largo plazo o en dosis altas-puede aumentar la probabilidad de sensibilización.
Irritación de la piel y las mucosas.
Manifestaciones clínicas
Irritación de la piel: la exposición prolongada puede causar enrojecimiento, sequedad, descamación e incluso dermatitis de contacto.
Irritación de los ojos: el polvo que entra en los ojos puede causar ardor, lagrimeo y congestión conjuntival.
Mecanismo de ocurrencia
La actividad proteolítica de la proteinasa K puede alterar la barrera del estrato córneo de la piel, mientras que la fricción física de las partículas de polvo intensifica la irritación. La conjuntiva es más susceptible al daño químico debido a su delgada mucosa y abundantes vasos sanguíneos.
Etiqueta: proteinasa k en polvo cas 39450-01-6, proveedores, fabricantes, fábrica, venta al por mayor, compra, precio, a granel, en venta