Z-ARG-LEU-ARG-GLY-GLY-AMC CAS 167698-69-3

A menudo se utiliza como sustrato peptídico para el SARS-CoV PLpro (proteasa similar a la papaya del coronavirus del síndrome respiratorio agudo severo). El SARS-CoV es un coronavirus y su PLpro es una enzima clave en el proceso de replicación del virus y participa en el procesamiento de proteínas poliméricas virales. Por lo tanto, tiene un valor de aplicación importante en el estudio del mecanismo de replicación del SARS-CoV, la detección de fármacos antivirales y el desarrollo de vacunas.

También puede servir como sonda fluorescente para imágenes biológicas y investigaciones de localización celular. Debido a la presencia del grupo AMC (aminometilcumarina), este péptido exhibe propiedades de fluorescencia y puede emitir fluorescencia bajo excitación. Esto permite el etiquetado de moléculas o estructuras específicas en células y tejidos, revelando así los cambios dinámicos de los procesos biológicos.

También se puede utilizar para detección de inhibidores y análisis continuos de alto-rendimiento. En el proceso de desarrollo de fármacos, es fundamental encontrar compuestos que puedan inhibir eficazmente la actividad de enzimas o proteínas específicas. Como sustrato peptídico para PLpro, se puede utilizar junto con inhibidores potenciales para evaluar su actividad midiendo los cambios en la tasa de hidrólisis del sustrato. Este método tiene las ventajas de un alto rendimiento, alta sensibilidad y alta especificidad, lo que puede acelerar en gran medida el proceso de detección de fármacos.

Además, también se puede aplicar a la investigación inmunológica. Las sustancias peptídicas desempeñan un papel importante en el sistema inmunológico y pueden participar en la respuesta inmunitaria como antígenos o anticuerpos. La secuencia y estructura específicas de Z-ARG-LEU-ARG-GLY-AMC pueden otorgarle inmunogenicidad o inmunorreactividad, lo que lo hace adecuado para la preparación de anticuerpos, vacunas o reactivos de inmunodiagnóstico.

PLpro es responsable del procesamiento de poliproteínas del virus y del escape inmunológico del huésped, y es un objetivo clave para los medicamentos antivirales. Z-LRGG-AMC, como sustrato específico de PLpro, tiene una eficiencia de escisión más de tres veces mayor que los sustratos tradicionales como Z-Gly-Gly Arg AMC. En la detección de fármacos, se pueden identificar rápidamente posibles fármacos antivirales detectando la tasa de inhibición de los compuestos en la escisión de PLpro de Z-LRGG-AMC.

For example, a study used this substrate to screen candidate molecules with inhibition rate>El 90% de una biblioteca de 100.000 compuestos, lo que proporciona un apoyo clave para el desarrollo de fármacos antivirales como el remdesivir. Al comparar la eficacia de corte de diferentes cepas de virus PLpro en Z-LRGG-AMC, se puede revelar el efecto de la variación del virus sobre la actividad de la proteasa. Por ejemplo, la tasa de reducción de SARS-CoV-2 PLpro en Z-LRGG-AMC es 1,5 veces más rápida que la de SARS-CoV PLpro, lo que sugiere que puede tener una capacidad reguladora inmunitaria más fuerte del huésped.

IPaseT y otros DUB regulan la degradación de proteínas mediante la escisión de la secuencia C-terminal de la ubiquitina. Z-LRGG-AMC simula la estructura C-terminal de la ubiquitina, con un valor kcat/Km de 18 M ⁻¹ s ⁻¹, lo que lo convierte en un sustrato ideal para estudiar la cinética de DUB. Por ejemplo, en la investigación del cáncer, la relación entre el desequilibrio de la homeostasis de las proteínas y la progresión del tumor se puede evaluar detectando la actividad de escisión de DUB en Z-LRGG-AMC en células tumorales.

Combinado con la tecnología de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET), Z-LRGG-AMC se puede utilizar para el seguimiento en tiempo real-de los procesos de modificación de la ubiquitinación intracelular. Por ejemplo, en un modelo de enfermedad neurodegenerativa, la detección del nivel de ubiquitinación de alfa sinucleína revela la asociación entre su agregación y la disfunción del proteosoma.

En una placa de 384 pocillos, se mezcló Z-LRGG-AMC con el compuesto de prueba y los inhibidores enzimáticos se detectaron rápidamente mediante cambios en la señal de fluorescencia. Este método tiene un alto rendimiento (puede detectar miles de compuestos por día) y un bajo costo (costo de un solo poro).<0.1 USD), and has become a standard process for drug development. By changing the substrate concentration, the Km (Michaelis constant) and Vmax (maximum reaction rate) of the enzyme on Z-LRGG-AMC were determined, providing a theoretical basis for inhibitor design. For example, a study used this substrate to determine a Km value of 12 μ M for PLpro, providing key data for optimizing inhibitor affinity.