Sustanón CAS 58-22-0

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Sustanón, también conocida como testosterona, testosterona y testosterona, con la fórmula molecular de C19H28O2, es un polvo cristalino blanco, soluble en etanol, éter y disolventes orgánicos, pero insoluble en agua. Es un tipo de hormona esteroide secretada por los testículos masculinos o los ovarios femeninos. La glándula suprarrenal también secreta una pequeña cantidad de testosterona. Tiene las funciones de mantener la fuerza y ​​calidad muscular, mantener la densidad y fuerza ósea, refrescar y mejorar la fuerza física.

La testosterona es una glicoproteína secretada identificada originalmente a partir del medio de enriquecimiento de células de Sertoli de testículo de ratón. Es una proteína asociada al citoesqueleto con un peso molecular pequeño, que puede unirse estrechamente a la superficie celular a través de una proteína asociada al receptor.

uso desustanon:

Uso médico: Se utiliza para el tratamiento alternativo de la orquitis, el síndrome de menopausia masculina, la impotencia y otras enfermedades.

Uso deportivo: aumentar el número de músculos. Algunas personas que hacen ejercicio para aumentar su masa muscular utilizan una dosis 250 veces la dosis terapéutica.

Otros usos: investigación bioquímica; Andrógeno natural, que controla el desarrollo y crecimiento de los órganos sexuales masculinos y los signos parasexuales masculinos.

Riesgo: Acné, edema.

Síntesis de testosteronasustanon:

Informe I

Paso 1: disuelva 30 g de androstenediona en 10 veces el peso de una mezcla de disolvente (diclorometano: tetrahidrofurano=1 ∶ 1) y enfríelo a - 15 grados.

Paso 2: disuelva 3 g de borohidruro de potasio en 30 ml de agua destilada o agua pura.

Paso 3: agregue la solución acuosa de borohidruro de potasio obtenida en el segundo paso al sistema de reacción a - 8 grado obtenido en el primer paso con una bomba peristáltica, y el caudal es de 0,2 ml/min.

Paso 4: Después de la adición, reaccione de - 5 grado a - 10 grado hasta que se complete la reacción de androstenediona (seguimiento por HPLC), agregue 1 g de ácido acético glacial para destruir el exceso de borohidruro de potasio, gire para recuperar el solvente, agregue 450 ml de agua destilada, enfríe a 10 grados, filtre, lave y seque al vacío para obtener el producto crudo.

Paso 5: Disolver el producto crudo con 10 veces el peso de etanol absoluto, agregar 5% en peso de carbón activo para la decoloración, filtrar en caliente, concentrar 85% en peso de etanol a presión reducida, congelar, cristalizar, filtrar, lavar con etanol absoluto congelado y secar al vacío a 80 grados para obtener cristales blancos. Se prueba la calidad y los resultados son los siguientes:

Punto de fusión: 153-156 grados (valor bibliográfico: 152-156 grados); El contenido es 98,5% (p/p) (método HPLC); Espectro de masas: 289 [M - H]+; Resonancia magnética nuclear 1HNMR (CDCl3) 0,79 (s, 3H, CH3), 1,12 (s, 3H.CH3), 3,66 (t, 1H), 5,72 (s, H, CH); IR (KBr, v/cm-1): 352933813027294328732847165616101056.

Después de la prueba, el producto es testosterona. El contenido del subproducto 3,17 diol fue del 0,45 % (p/p) y el rendimiento de testosterona fue superior al 93 % (p/p).

Informe II:

Paso 1: Construcción de una cepa recombinante de Y.lipolytica Polh

Utilizando el gen completamente sintetizado en el laboratorio como plantilla, el gen de la enzima se obtuvo mediante PCR y el vector de clonación se conectó para lograr una gran cantidad de amplificación genética. 17 que se amplificará enormemente - Después de la purificación, los fragmentos de los genes hsd3 y gdh se conectaron respectivamente a los vectores pINA1292 y pYLSC. Después de la verificación, se transformó la cepa modelo Y.lipolytica Polh. Los transformantes positivos se examinaron en la placa resistente, se inocularon en un matraz agitado para la fermentación y se detectó mediante HPLC el producto TS en el caldo de fermentación. Se detectó TS, lo que indica que la cepa recombinante con AD a TS se construyó con éxito. La invención finalmente obtiene una cepa de Y.lipolytica Polh que puede transformar eficientemente AD en TS.

Paso 2: Determinación de la actividad enzimática de la cepa recombinante

Método de determinación de la actividad enzimática: se utilizó el método HPLC. Los métodos específicos son los siguientes: tomar 50 ml de solución bacteriana cultivada durante 24 h, centrifugar a 4 grados a 8000 r/min durante 5 minutos, recoger las bacterias, lavarlas dos veces con 50 ml de solución tampón Tris HCl con pH 7,0 y luego resuspenderlas en 5 ml de solución tampón . 40 % de potencia de trituración ultrasónica en baño de hielo, trabajando durante 2 s y 5 s de forma intermitente, trabajando durante 10min. El sobrenadante se obtuvo mediante centrifugación a 10.000 r/min durante 30 minutos, y el sobrenadante fue la proteína diana. El método de medición de la actividad enzimática es el siguiente: el sistema de medición de la actividad enzimática de 1 ml incluye NADPH 0,5 mM, AD 200 μ M (disuelto en metanol) y luego agrega una cantidad adecuada de solución enzimática. Definición de unidad de actividad enzimática: conversión de 1 minuto a 37 grados μ. La cantidad de TS producida por mol de AD se define como una unidad de actividad enzimática (U). Método de determinación de la actividad de la glucosa deshidrogenasa: el sistema de reacción de 1 ml incluye tampón de fosfato de sodio 50 mM (pH 6,5), glucosa 10 mM y NADP 1 μ M.+. Determine la actividad de acuerdo con el cambio del valor de absorbancia de NADPH a 340 nm. La definición de unidad de actividad enzimática es: 1 por minuto μ La cantidad de enzima requerida por mol de NADPH. La actividad enzimática alcanzó 7,35 U/mg y 4,23 U/mg respectivamente.

Paso 3: Detección del rendimiento de la transformación de células completas de la cepa recombinante

La cepa se inoculó en 100 ml de medio BMGY con una cantidad de inoculación del 5% durante 24 h, y luego se inoculó en un tanque de fermentación de 5 litros con 2 litros de medio BMGY con una cantidad de inoculación del 5% durante 4 días. Centrifugue la célula, lávela dos veces, vuelva a disolverla con una cierta cantidad de solución tampón Tris HCl pH 7,5 50 mM, agregue el sustrato AD para la conversión y las condiciones de conversión son: la temperatura de conversión es 37 grados, el pH de conversión es 7,5 y el codisolvente del sustrato está metilado.- - Ciclodextrina (relación molar: 1:1), biomasa: 200 g/L, concentración del sustrato: 5g/L. Después de tres veces de alimentar la transformación de células completas, 15 g/L de androstenediona se transforma en 14,3 g/L de testosterona, que es la primera vez en el país y en el extranjero que se utiliza androstenediona para producir testosterona en Pichia pastoris mediante la construcciónsustanonsistema de reciclaje de coenzima, y ​​finalmente lograr el objetivo de mejorar la tasa de transformación y producir testosterona de manera eficiente.

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