Polvo de liraglutida CAS 204656-20-2

Polvo de liraglutida, Fórmula molecular C172H265N43O51, CAS 204656-20-2, peso molecular 1209.40. Es un análogo de glucagón humano acilado artificialmente sintetizado como péptido-1 (GLP-1) con más del 97% de similitud de secuencia en comparación con GLP-1 natural. Se puede disolver en agua, etanol y propilenglicol. La posición 34 de lisina de la molécula natural GLP-1 se reemplaza por arginina, que no solo preserva y prolonga el tiempo de unión entre los productos de acilación y las proteínas, sino que también supera significativamente la desventaja de la fácil degradación de GLP. En condiciones de almacenamiento normales, exhibe una buena estabilidad, y su solución acuosa puede mantener la estabilidad física y química durante al menos 2 años.

Toxicidad genética: los resultados de la prueba de Ames paraPolvo de liraglutida, la prueba de aberración cromosómica para los linfocitos de sangre periférica humana, y la prueba de micronúcleo de rata fueron todos negativos.

Toxicidad reproductiva:

1. Las ratas machos se inyectaron subcutáneamente con 0.1, 0.25 y 1.0 mg/kg/d de liraglutida 4 semanas antes del apareamiento y durante el apareamiento. A una dosis de 1.0 mg/kg/d, la fertilidad animal masculina no se vio directamente afectada. Según los cálculos de AUC en plasma, la exposición sistémica generada por esta dosis fue aproximadamente 11 veces la de la exposición humana a la dosis humana máxima recomendada (MRHD). La inyección subcutánea de 1.0 mg/kg en ratas hembras dio como resultado una mayor muerte embrionaria temprana, aumento de peso visible y disminución de la ingesta de alimentos.

2. Desde 2 semanas antes del apareamiento hasta el día 17 de embarazo en ratas hembras, se administraron inyecciones subcutáneas de 0.1, 0.25 y 1.0 mg/kg/d de liraglutida. Según los cálculos de AUC en plasma, la exposición sistémica generada por estas tres dosis fue de aproximadamente 0.8, 3 y 11 veces la de la exposición humana bajo MRHD, respectivamente. En el grupo de dosis de 1 mg/kg/d, hubo un ligero aumento en el número de muertes embrionarias tempranas. En todas las dosis, se observaron anormalidades fetales, variaciones renales y vasculares, osificación irregular del cráneo y un estado completo de osificación excesiva. A una dosis de 1.0 mg/kg/d, se observó hígado manchado y torsión de costillas ligeras. La incidencia de malformaciones fetales que exceden el mismo período y el control histórico es: malformaciones orofaríngeas y/o estenosis en la abertura de la garganta a una dosis de 01 mg/kg/d, y defectos umbilicales a dosis de 0.1 y 0.25 mg/kg/d.

El día 6 al 18 del embarazo, los conejos se inyectaron subcutáneamente con liraglutida a concentraciones de 0.01, 0.025 y 0.05 mg/kg/d. Según los cálculos de Plasma AUC, la exposición sistémica de conejos embarazadas fue menor que la de los humanos durante MRHD. En todas las dosis, el peso fetal disminuyó y la incidencia general de anomalías fetales severas aumentó de una manera dependiente de la dosis. At doses of 0.01mg/kg/d (kidney, shoulder and spleen bones),>=0.01mg/kg/d (eyes and forelimbs), 0.025mg/kg/d (brain, tail and vertebrae, large blood vessels and heart, umbilical cord),>=0.025mg/kg/d (sternum), and 0.05 mg/kg/d (hueso parietal y grandes vasos sanguíneos), la incidencia de malformaciones excedió la de los controles contemporáneos e históricos. La osificación irregular y/o las anormalidades esqueléticas se encuentran en el cráneo y el collar, las vértebras y las costillas, el esternón, la pelvis, el cóccix y los huesos de hombro y bazo; También hay una ligera variación esquelética dependiente de la dosis visible. Las anomalías viscerales se encuentran en los vasos sanguíneos, pulmones, hígado y esófago. Todos los grupos de tratamiento mostraron lóbulos dobles o bifurcaciones de la vesícula biliar, pero no se observó una situación similar en el grupo de control.

4. Durante el período desde el día 6 del embarazo hasta el destete o la terminación de la lactancia en el día 24, las ratas hembras se inyectaron subcutáneamente con 0.1, 0.25 y 1.0 mg/kg/d de liraglutida. Según los cálculos de AUC en plasma, la exposición sistémica fue de aproximadamente 0.8, 3 y 11 veces que la exposición humana durante MRHD. El período de suministro de la mayoría de los animales en el grupo de tratamiento se retrasó ligeramente. El peso promedio de los recién nacidos en el grupo de tratamiento fue menor que el del grupo de control. Las ratas hembras en el grupo de dosis de 1.0 mg/kg/d exhibieron un comportamiento de pérdida de sangre y emoción durante el parto. El peso corporal promedio de las ratas descendientes F2 en el grupo de tratamiento desde el nacimiento hasta el día 14 después del nacimiento fue menor que el del grupo de control, pero las diferencias entre los grupos no alcanzaron la significación estadística.

Polvo de liraglutidaes un glucágono humano acilado artificialmente sintetizado como el análogo del péptido-1 (GLP-1) con más del 97% de similitud de secuencia en comparación con GLP-1 natural. La estructura molecular de la liraglutida incluye las siguientes características principales: la 34a posición de lisina de la molécula GLP-1 natural se reemplaza por arginina, que no solo preserva y prolonga el tiempo de unión entre los productos de acilación y las proteínas, sino que también supera significativamente la desventaja de la fácil degradación de GLP; Se agregó una cadena lateral adicional de ácidos grasos a la 26a lisina, que ayuda a prolongar la vida media de los productos de acilación in vivo. Estos cambios moleculares únicos han hecho que la delilaglutida muestre efectos sobresalientes en el tratamiento clínico, especialmente en la diabetes y la pérdida de peso.

Los métodos químicos para sintetizar liraglutida incluyen principalmente los siguientes pasos:

1. Síntesis de fragmentos

En primer lugar, divida toda la liraglutida en varios segmentos, que generalmente se pueden dividir en cinco segmentos: los aminoácidos del primer a 4 °, 5º al décimo aminoácidos, los aminoácidos 11 al 16, aminoácidos del 17 al 24 y los aminoácidos del 25 al 31 a 31. Cada fragmento se sintetiza por separado, lo que puede reducir la dificultad y el costo de la síntesis de péptidos y mejorar la eficiencia de la síntesis.

Para la síntesis de cada fragmento, generalmente se usan la síntesis de fase sólida o los métodos de síntesis de fase líquida. El método de síntesis de fase sólida implica conectar los grupos carboxilo de aminoácidos a la resina, luego agregar secuencialmente los aminoácidos a la resina en secuencia y finalmente cortar los péptidos de la resina. El método de síntesis de fase líquida implica disolver todos los aminoácidos en un disolvente orgánico y luego condensarlos en secuencia para formar fragmentos de péptidos.

2. Reacción de acoplamiento

Realice la reacción de acoplamiento en los 5 fragmentos de péptidos sintetizados en el paso 1 para formar una liraglutida completa. La reacción de acoplamiento se puede llevar a cabo utilizando agentes de acoplamiento químico o biológico, y el método específico se puede seleccionar de acuerdo con las necesidades reales.

En la reacción de acoplamiento, es necesario conectar el grupo amino de cada fragmento con el grupo carboxilo del siguiente fragmento. Para lograr esto, generalmente es necesario usar agentes de condensación como DIC o BOP. Estos agentes de condensación pueden promover la reacción entre los grupos amino y carboxilo, formando enlaces peptídicos. En la reacción de acoplamiento, también se debe prestar atención al controlar las condiciones de reacción, como la temperatura, el valor de pH y el tiempo de reacción, para garantizar el progreso suave de la reacción.

3. Purificación e identificación

La liraglutida sintetizada debe purificarse e identificarse para garantizar la pureza y la calidad del producto. La purificación generalmente se lleva a cabo utilizando métodos como la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) o la electroforesis, seguida de identificación utilizando espectrometría de masas, resonancia magnética nuclear y otros métodos. A través de estos medios, se puede garantizar que el peso molecular y la secuencia del producto sintetizado sean consistentes con las expectativas, y no hay impurezas ni residuos de subproductos.

4. Otras modificaciones

Además de los pasos anteriores, a veces se requieren otras modificaciones, como agregar o eliminar grupos de protección. Estos pasos también son esenciales, ya que pueden proteger a los grupos activos en los péptidos de ser destruidos o se producen reacciones laterales, mejorando la calidad y el rendimiento de sintetizadosPolvo de liraglutida.

Los anteriores son los principales métodos químicos para sintetizar la liraglutida, pero, por supuesto, algunos detalles y técnicas deben tenerse en cuenta en la operación práctica. Por ejemplo, seleccionar el sistema de solvente apropiado, el control de la temperatura y el pH, y el uso de catalizadores apropiados puede afectar la eficiencia de la síntesis y la calidad del producto. Por lo tanto, en la operación práctica, los ajustes y las optimizaciones deben hacerse de acuerdo con circunstancias específicas.

La liraglutida (un agonista del receptor GLP-1 de acción prolongada) juega un papel importante en el tratamiento de la diabetes. Para garantizar su capacidad de control de calidad, es necesario establecer métodos analíticos científicos y rigurosos, y realizar una validación sistemática para garantizar la confiabilidad de estos métodos. El siguiente análisis se lleva a cabo a partir de tres aspectos: elementos de validación, métodos de validación y puntos de control clave.

Elementos de verificación del núcleo y requisitos técnicos

Especificidad

Objetivo: demostrar que el método puede distinguir la liraglutida de las impurezas, los productos de degradación y los excipientes.

Estrategia de implementación:

Cromatografía: use HPLC-UV o UPLC-MS. A través de pruebas de degradación forzada (como alta temperatura, exposición a la luz, hidrólisis ácida-base), generan productos de degradación y verifique el grado de separación del pico principal y el pico de impureza (mayor o igual a 1.5). Por ejemplo, en el estudio del modelo APOE-/- ratón, después de que se oxida la liraglutida, los productos de degradación (como los aductos de ácido fórmico) deben confirmarse mediante análisis cromatográfico para garantizar el efecto de separación de los productos de degradación del pico principal.

Espectroscopía: use un detector PDA para comparar los espectros UV del pico principal e impurezas, y confirmar la pureza de los picos.

Control en blanco: verifique la ausencia de señales falsas positivas usando muestras sin liraglutida (como soluciones de excipientes).

 

Exactitud

Objetivo: para garantizar que los resultados medidos estén cerca del valor verdadero y la tasa de recuperación se controla dentro del 98% - 102%.

Estrategia de implementación:

Prueba de recuperación de adición estándar: agregue una cantidad conocida de sustancia de referencia a una muestra con contenido de liraglutida conocido y mida la tasa de recuperación. Por ejemplo, en el análisis de la formulación, agregue 0.5 mg/ml, 1.0 mg/ml y 1.5 mg/ml de liraglutida a la solución de excipiente en blanco, repita cada concentración 3 veces y calcule la tasa de recuperación promedio.

Método de comparación: Compare con métodos clásicos (como la titulación) o métodos verificados (como los métodos de farmacopeo), y la desviación del resultado debe ser menor o igual al 2%.

 

Precisión

Objetivo: evaluar el grado de cercanía de los resultados de medición repetidos, con RSD menor o igual al 2%.

Estrategia de implementación:

Repetibilidad: realizar 6 mediciones consecutivas de la misma muestra por el mismo analista, el mismo instrumento y el mismo lote de muestras, y calcule el RSD.

Precisión intermedia: calcule el RSD determinando el mismo lote de muestras por diferentes analistas, diferentes instrumentos y diferentes fechas. Por ejemplo, en la determinación del contenido de liraglutida, la repetibilidad RSD debe ser menor o igual al 1.5%, y el RSD de precisión intermedio debe ser menor o igual al 2.0%.

Reproducibilidad: verificación colaborativa de múltiples laboratorios (como los métodos estándar de farmacopeo), RSD debe cumplir con los principios de orientación.

 

Límite de detección y límite de cuantificación

Objetivo: determinar la concentración mínima que el método puede detectar y cuantificar la liraglutida.

Estrategia de implementación:

Método de relación señal / ruido: Determine LOD con una relación señal / ruido 3: 1 y determine LOQ con una relación señal / ruido de 10: 1. Por ejemplo, en el método HPLC-UV, el LOD de la liraglutida puede ser tan bajo como 0.01 ug/ml, y el LOQ es 0.05 ug/ml.

Método de curva estándar: Calcule LOD y LOQ utilizando las señales de respuesta de las sustancias estándar de baja concentración (como 0.1 ug/ml - 1 ug/ml).

 

Linealidad

Objetivo: demostrar que la señal de respuesta es proporcional a la concentración, con r² mayor o igual a 0.999.

Estrategia de implementación:

Prueba de concentración de gradiente: Prepare 5-7 gradientes de concentración (como 0.1 mg/ml - 2.0 mg/ml) de soluciones estándar, mida el área máxima o el valor de respuesta, y dibuje la curva estándar.

Análisis residual: verifique si los residuos se distribuyen aleatoriamente y no hay desviación sistemática.

 

Rango

Objetivo: determinar el rango de concentración aplicable del método, generalmente el 120% del LOQ al límite superior de linealidad.

Estrategia de implementación:

Determinación del contenido: el rango se establece en 80% - 120% de la cantidad etiquetada. Por ejemplo, el rango de determinación de contenido de la formulación de liraglutida debe ser 0.4 mg/ml - 1.2 mg/ml. Control de impureza: de acuerdo con la directriz Q3D ICH, establece el rango límite de impurezas (por ejemplo, impureza única menor o igual al 0.5%, impureza total menor o igual a 2.0%).

Documentos de validación y gestión de datos

01

Plan de validación e informe

Defina claramente los elementos de validación, los métodos, los estándares de aceptación y los procedimientos de manejo anormales. Por ejemplo, si el RSD de precisión excede el límite, es necesario investigar fallas de instrumentos o errores operativos.

Registre los datos originales (como cromatogramas, curvas estándar, tablas de cálculo de la tasa de recuperación) para garantizar la trazabilidad.

02

Desarrollo del método de indicación de estabilidad

Para las pruebas de degradación obligatoria, debe cubrir la oxidación, la exposición a la luz, la hidrólisis, etc., para simular las condiciones de almacenamiento reales. Por ejemplo, la liraglutida colocada a 60 grados durante 48 horas, la tasa de degradación debe ser mayor o igual al 10% para verificar la capacidad del método para detectar productos de degradación.

03

Cumplimiento regulatorio

Sigue a ICH Q2 (R2), USP<1225>, y las pautas de GMP chinas para garantizar que los elementos de validación cubran los indicadores centrales, como la especificidad y la precisión.

Para el análisis de impurezas elementales, debe cumplir con ICH Q3D y USP<233>requisitos, controlar los límites de elementos de 1 clase como AS, CD y PB.

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