retatrutida(enlace:https://www.bloomtechz.com/synthetic-chemical/peptide/retatrutide-powder-cas-2381089-83-2.html) es un agonista del polipéptido GLP-1R/GIPR/GCGR de acción prolongada sintetizado químicamente, que está indicado para el tratamiento de la diabetes tipo 2 en adultos, el control del peso y el hígado graso no alcohólico/esteatohepatitis no alcohólica. La indicación para diabetes tipo 2 en adultos de este producto fue aprobada para uso clínico el 29 de agosto de 2023. Además, la solicitud de registro clínico de indicaciones para hígado graso no alcohólico/esteatohepatitis no alcohólica se encuentra en la etapa de revisión final. Hay ocho agonistas de GLP-1R/GIPR/GCGR en desarrollo en el mundo, de los cuales, Retatrutide de Rita ha logrado el progreso más rápido y lanzó el ensayo clínico de tercera fase en junio de este año. En el mismo mes, Rita anunció que los datos de la investigación de la segunda fase de retatrutida se publicaron en la reunión anual de la ADA, mostrando que a las 24 semanas, retatrutida (1 mg, 4 mg, 8 mg o 12 mg) alcanzó el principal criterio de valoración de eficacia. evaluación para participantes obesos o con sobrepeso sin diabetes, con una pérdida de peso promedio del 17,5%. Entre los criterios de valoración secundarios, se logró una pérdida de peso promedio del 24,2% al final de 48 semanas de tratamiento. También hemos sintetizado el péptido en el laboratorio según el método publicado. El método de síntesis específico se describirá brevemente y los pasos específicos pueden enviarnos por correo electrónico.
Método 1:
Los pasos detallados para sintetizar Retarutide mediante síntesis de estado sólido en el laboratorio son los siguientes:
Prepare los reactivos e instrumentos necesarios: incluidos aminoácidos, diclorometano, carbonato de potasio, gel de sílice etoxilado, acetonitrilo, piridina, N-metilmorfolina, fuente de cloruro de diisopropiletilo, ácido trifluoroacético, DIPEA, aminoácidos protegidos con Boc y otros reactivos, así como agitadores magnéticos. , evaporadores rotativos y otros instrumentos.
(1) Síntesis de aminoácidos protegidos con Boc: disuelva los aminoácidos requeridos en diclorometano, agregue carbonato de potasio en polvo, revuelva uniformemente, agregue gel de sílice etoxilado, continúe revolviendo y luego agregue piridina y N-metilmorfolina para obtener aminoácidos protegidos con Boc.
(2) Síntesis en fase sólida: mezcle acetonitrilo, fuente de cloruro de diisopropiletilo y ácido trifluoroacético, revuelva uniformemente, agregue los aminoácidos protegidos con Boc preparados y continúe agitando para obtener el producto de síntesis en fase sólida.
(3) Grupo de desprotección: disolver la síntesis en fase sólida en diclorometano, agregar ácido trifluoroacético, agitar uniformemente y luego agregar DIPEA. Continuar agitando para obtener la síntesis en fase sólida desprotegida.
(4) Purificación: disolver la síntesis en fase sólida desprotegida en agua, ajustar el pH a aproximadamente 9,0 con solución de hidróxido de sodio, luego ajustar el pH a aproximadamente 5,0 con ácido acético y, finalmente, precipitar el producto puro con éter.
Método 2:
Los pasos detallados para sintetizar Retarutide mediante síntesis en fase líquida en el laboratorio son los siguientes:
Prepare los reactivos e instrumentos necesarios: incluidos arginina, glicina, anhídrido acético, trietilamina, carbonato de potasio, diclorometano, metanol, piridina, N-metilmorfolina, anhídrido acético, acetato de sodio y otros reactivos, así como instrumentos como agitadores, embudos de separación, bombas de vacío, hornos y columnas cromatográficas.
(1) Disuelva arginina y glicina en una cantidad adecuada de diclorometano, agregue una cantidad adecuada de anhídrido acético y trietilamina y agite uniformemente con un agitador.
(2) Transfiera la mezcla disuelta a un horno y caliéntela a 80 grados C durante 1 hora para acetilar los residuos de aminoácidos.
(3) Neutralice la solución reaccionada con carbonato de potasio en polvo para neutralizar el ácido acético en la solución para generar acetato de sodio y luego extraiga el péptido generado con diclorometano.
(4) Lavar la solución de péptido extraído con metanol y filtrar con una bomba de vacío para obtener el péptido crudo.
(5) Disolver el péptido crudo en una cantidad apropiada de piridina y N-metilmorfolina, agregar una cantidad apropiada de anhídrido acético y acetato de sodio y agitar uniformemente con un agitador.
(5) Filtrar la solución reaccionada con una bomba de vacío, lavar la torta de filtración con metanol y luego filtrar con una bomba de vacío para obtener la Restarutide final.
Método 3:
Los pasos detallados para sintetizar Retarutide utilizando métodos químicos en el laboratorio son los siguientes:
Prepare los reactivos e instrumentos necesarios: incluidos arginina, glicina, anhídrido acético, trietilamina, carbonato de potasio, diclorometano, metanol, piridina, N-metilmorfolina, anhídrido acético, acetato de sodio y otros reactivos, así como instrumentos como agitadores, embudos de separación, bombas de vacío, hornos y columnas cromatográficas.
(1) Disuelva arginina y glicina en una cantidad adecuada de diclorometano, agregue una cantidad adecuada de anhídrido acético y trietilamina y agite uniformemente con un agitador.
(2) Transfiera la mezcla disuelta a un horno y caliéntela a 80 grados C durante 1 hora para acetilar los residuos de aminoácidos.
(3) Neutralice la solución reaccionada con carbonato de potasio en polvo para neutralizar el ácido acético en la solución para generar acetato de sodio y luego extraiga el péptido generado con diclorometano.
(4) Lavar la solución de péptido extraído con metanol y filtrar con una bomba de vacío para obtener el péptido crudo.
(5) Disolver el péptido crudo en una cantidad apropiada de piridina y N-metilmorfolina, agregar una cantidad apropiada de anhídrido acético y acetato de sodio y agitar uniformemente con un agitador.
(6) Filtrar la solución reaccionada con una bomba de vacío, lavar la torta de filtración con metanol y luego filtrar con una bomba de vacío para obtener la Restarutide final.
Se requieren múltiples reacciones de síntesis orgánica para obtener la molécula objetivo. Además, este método utiliza múltiples reactivos orgánicos y condiciones operativas complejas, por lo que la síntesis química de rotarutida en el laboratorio no suele ser adecuada para aplicaciones industriales o de producción a gran escala. Para aplicaciones industriales o de producción a gran escala, el método más comúnmente utilizado es preparar rotarutida mediante métodos de síntesis como la biosíntesis o la síntesis en fase líquida, que son relativamente pequeños a escala de laboratorio, de operación relativamente simple y adecuados para preparar pequeñas cantidades de productos. . La Retarutida obtenida mediante estos métodos es similar o similar en estructura y actividad biológica a la Retarutida sintetizada por métodos químicos, pero tiene las ventajas de un mayor rendimiento y una preparación más sencilla. Al mismo tiempo, también tienen un mayor potencial de industrialización y perspectivas de aplicación más amplias.
Método 4:
Los pasos detallados para sintetizar Retarutide utilizando métodos biológicos en el laboratorio son los siguientes:
Preparación de los genes y reactivos necesarios: obtenga plásmidos que contengan el gen Retatrutide de la biblioteca de genes, transforme los plásmidos con células receptoras (como Escherichia coli) y obtenga bacterias de ingeniería que contengan el gen Retatrutide.
(1) Cultivo de bacterias de ingeniería: en condiciones adecuadas de temperatura, pH y concentración de iones, utilice un medio de cultivo para cultivar bacterias de ingeniería, lo que les permitirá proliferar en grandes cantidades.
(2) Extracción de Retarutide: las bacterias de ingeniería cultivadas se trituran usando una trituradora y los fragmentos celulares se separan de Retarutide usando métodos como ultrafiltración y sedimentación para obtener el producto crudo.
(3) Purificación de Retarutide: La Retarutide cruda se purifica usando tecnología de cromatografía para obtener Retarutide de alta pureza.
Detección e identificación de rotarutida: utilice cromatografía líquida de alto rendimiento, espectrometría de masas, resonancia magnética nuclear y otras técnicas para detectar e identificar la estructura de rotarutida purificada.
La ecuación de reacción química para la síntesis biológica de Retarutide en el laboratorio implica principalmente reacciones químicas durante el proceso de expresión genética, incluidos dos pasos: transcripción y traducción.
Transcripción: El ADN bicatenario se abre, utilizando una de las hebras como plantilla para sintetizar las hebras de ARN, lo que requiere la participación de la ARN polimerasa. La ecuación de reacción es la siguiente:
ADN bicatenario: DNApol → mRNA+DNApol
Traducción: Los ribosomas se unen al ARNm para sintetizar cadenas peptídicas, proceso que requiere la participación de aminoácidos y energía. La ecuación de reacción es la siguiente:
Ribosoma+ARNm → Cadena peptídica+PIB+Pi+H2O
Cadena peptídica+ATP → Cadena peptídica+AMP+PPi
Entre ellos, DNApol representa la ADN polimerasa; ARNm representa ARN mensajero; Los ribosomas representan ribosomas; Las cadenas peptídicas representan cadenas polipeptídicas; El PIB representa difosfato de guanosina; Pi representa ácido fosfórico inorgánico; H2O representa agua; ATP representa trifosfato de adenosina; AMP representa monofosfato de adenosina; PPi representa pirofosfato inorgánico. Estas reacciones generan las cadenas peptídicas necesarias para la síntesis de Retarutide, que luego se procesan y modifican en las etapas posteriores para obtener Retarutide.
Los anteriores son métodos comunes para la síntesis de rotarutida en el laboratorio, cada uno con diferentes ventajas, desventajas y ámbito de uso. El laboratorio generalmente utiliza métodos de síntesis en fase líquida y síntesis en fase sólida para producción a pequeña escala para investigación y uso experimental; La producción industrial, por otro lado, adopta una combinación de biosíntesis y producción en fase líquida/sólida para que la producción a gran escala satisfaga la demanda del mercado. Cabe señalar que estos métodos requieren una estricta optimización de las condiciones y control del proceso para garantizar la calidad y pureza del producto final.