Isotiocianato de fluoresceínaRed naranja, rojo fluorescente de isotiocianato fluorescente, 5- isotiocianato fluoresceína . Polvo amarillo . Es hygroscópico {{}} not lose the specificity of binding with certain antigen. It still has strong green fluorescence in alkaline solution. After adding acid, it precipitates, and the fluorescence disappears. It is slightly soluble in acetone, ether and petroleum ether. It is a biochemical reagent as well as a medical diagnostic drug, which can quickly diagnose diseases caused by bacteria, viruses, parasites, etc. In addition, it can bind with various antibody proteins, and the antibody after binding does not lose the specificity of binding with certain antigen, and there is still strong green fluorescence in alkaline solution. After adding acid, it precipitates, and the fluorescence desaparece, y es ligeramente soluble en acetona, éter y éter de petróleo .
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Fórmula química |
C21H11NO5S |
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Masa exacta |
389 |
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Peso molecular |
389 |
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m/z |
389 (100.0%), 390 (22.7%), 391 (4.5%), 391 (2.5%), 391 (1.0%), 392 (1.0%) |
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Análisis elemental |
C, 64.78; H, 2.85; N, 3.60; O, 20.54; S, 8.23 |
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Estudiar sobre las propiedades deisotiocianato de fluoresceínaInsulina etiquetada para la gelatina aminada y su aplicación en la administración de mucosa nasal:
Bajo la condición de no emulsionador externo, la solución acuosa de la gelatina aminada se dispersó en aceite de oliva, y se preparó un nuevo tipo de microesferas de gel cargadas positivamente, microesferas de gelatina aminadas, a través de los procesos de emulsificación, gellizos, deshidratación y retiración cruzada {}}} el tamaño promedio de las microesfules es {{2 {240-50}}}}}}}}}}}} m . El tamaño se distribuye uniformemente . Las microesferas secas pueden absorber aproximadamente 20 veces de su propio peso de agua para formar hidrogeles . amino de gelatina amino -microesferas tienen un contenido amino más alto que las microesferas de gelatina . En el agua destilada hay 41 . 5 MV.
With the increase of glutaraldehyde concentration or the extension of crosslinking reaction time, the amino content of microspheres decreased. However, regardless of the crosslinking reaction conditions, the aminated gelatin microspheres prepared by this method have higher primary amino content than the gelatin microspheres. Aminoated gelatin microspheres can be degraded rapidly (<1h) in the presence of trypsin, but slowly (>20h) en la pepsina y el medio a base ácida . la interacción entre las microesferas de gelatina aminizadas y la mucina es más fuerte que la de las microesferas de gelatina . La alta densidad de carga positiva de las microesferas de gelatina aminadas es la razón principal para su fuerte interacción con mucina. Las microesferas se estudiaron mediante el método de etiquetado de fluorescencia y la tecnología de degradación de enzimas in vitro, utilizando el modelo de lavado de perfusión gástrica de rata aislada y el experimento in vivo en ratas .
Los resultados mostraron que en las mismas condiciones experimentales, el número de microesferas de gelatina aminizadas retenidas en el estómago de rata aislado fue mayor que el de las microesferas de gelatina, y el tipo de solución de riego (jugo gástrico artificial o tampón de fosfato humano PH7) no tuvo un efecto significativo en la retención gástrica de las microesferas gástricas, lo que indicó que la intervención electrostática entre la microesferas microesferas y el gastrosferas de la microesferas microesferas y el gastrosferas se retención de la microesferas microferas y la microfera. Factor para la retención gástrica de microesferas en este modelo . Sin embargo, en el experimento, se descubrió que la cantidad de microesferas de gelatina aminizadas retenidas en la estomacal de rata aislada disminuyó con el aumento de la concentración del agente transversal de la glutaraldehído al glutaraldehído cuando la preparación de los microesferas, lo que indica la adhesión de la adhesión gástrica gástrica de los microesferas. por el contenido amino en la superficie de las microesferas o el grado de reticulación .
Los resultados experimentales in vivo en las ratas mostraron que las microesferas de gelatina amino tuvieron una mejor adhesión mucosa que las microesferas de gelatina . Los efectos de la gelatina aminada en la absorción nasal de glucano e insulina se investigaron en ratas sanas . que los resultados mostraron que 0 {{}}}}} 2% (wn) (wn). Promueva significativamente la absorción de flucosa de fluoresceína isothiocianat a partir de mucosa nasal de rata con una biodisponibilidad de 23 . 8%. Después de la administración intranasal de 10 tampón de fosfato de insulina de 10 UI que contiene 0 2% (w/v) gelatina amino, el nivel de glucosa en sangre fue significativamente más bajo que el del tampón de fosfato de insulina.
Isotiocianato de fluoresceína(FITC), como reactivo de etiquetado fluorescente clásico, se ha convertido en una herramienta indispensable en los campos de la biología, la medicina y la ciencia de los materiales debido a su alto rendimiento cuántico, una excelente fotostabilidad y una buena biocompatibilidad .
El grupo isotiocianato (- n=c=s) de FITC puede sufrir reacciones covalentes con grupos activos como los grupos amino y tiol en biomoléculas, formar complejos de etiquetado fluorescente estable . esta característica lo convierte en el reagente preferido para proteína, ácido nucleico y peptídico peptido {4 4
Marcado de proteínas e investigación funcional
FITC logra un etiquetado específico al unirse a los residuos de lisina de proteínas como anticuerpos y lectinas . Por ejemplo, en experimentos de inmunofluorescencia, los anticuerpos marcados con FITC pueden unirse a los antígenos de la superficie celular y cuantitativamente los niveles de expresión antigen a través de la microscopencia de fluorescencia o flujo de fluores de fluorescencia o cytometretimiento {.}} del conjugado de IgG FITC está relacionado linealmente con la concentración de antígeno, y la sensibilidad de detección puede alcanzar el nivel de Danak . Además, las proteínas marcadas con FITC también se pueden utilizar para estudios de interacción de proteínas, como el análisis de los cambios conformacionales de proteínas a través de la transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) Technology {}}}}}}}}}}
Marcado de ácido nucleico e hibridación molecular
FITC se puede modificar químicamente para etiquetar el extremo 5 'o 3' de los ácidos nucleicos para la hibridación in situ (pez) tecnología . En la investigación del cáncer, las sondas etiquetadas con FITC pueden unirse específicamente a las regiones abnormales cromosómicas para ayudar en el diagnóstico de las enfermedades hematológicas como la leucemia y la lymphoma {{{{}}}}}}} Deudas, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo, por ejemplo. Los genes de fusión BCR-ABL pueden mostrar señales fluorescentes amarillas en núcleos de células interfasas con una tasa de precisión de más del 95%.
Etiquetado de péptidos y administración de fármacos
Los péptidos etiquetados por FITC juegan un papel importante en los sistemas de suministro de fármacos . Tomando M2PEP-FITC como ejemplo, esta molécula está compuesta por un péptido M2PEP dirigido y un grupo fluorescente FITC, que puede reconocer específicamente los receptores de la superficie de células tumorales y lograr los experimentos de suministro de fármacos dirigidos. ha demostrado que la acumulación de acumulación de M2Pepseted Labos de suministro dirigido estampado {}} experimentos ha demostrado la acumulación de acumulación de M2Pepseted Labos de suministro de fármacos Los tejidos tumorales son 3 . 2 veces que los de fármacos libres, mejorando significativamente la eficacia terapéutica y reduciendo los efectos secundarios.
Las propiedades de fluorescencia de FITC lo convierten en el "estándar de oro" en el campo de los diagnósticos in vitro, ampliamente utilizadas en técnicas como inmunocromatografía, citometría de flujo y ELISA .
Detección rápida de patógenos
Los anticuerpos marcados con FITC se pueden utilizar para un diagnóstico rápido de infecciones bacterianas, virales y parásitas . Por ejemplo, en el diagnóstico de malaria, los anticuerpos antialaria marcados con FITC se unen a la mancha de sangre del paciente, y la señal de fluorescencia verde de la parásita se observa a través de la microscopía de fluorescencia .}}}} El tiempo de detección de los 2 horas de detección en el parásito se observa tradicional en la microscopía de la fluorescencia .}}}}}} El tiempo de detección de la parásita se observa tradicional en el tiempo de detección de la transcopia {1} Minutos, y la sensibilidad alcanza el 98%. Además, las sondas de ácido nucleico etiquetado por FITC también se pueden usar para detectar ácidos nucleicos del virus respiratorio, como el gen ORF1AB de SARS-CoV -2, con una especificidad de 99 . 2%.
Marcadores tumorales
En citometría de flujo,isotiocianato de fuoresceínaLos anticuerpos anti-CD45 marcados pueden distinguir las células de la leucemia de las células sanguíneas normales . Los datos muestran que la tasa positiva del anticuerpo CD34 marcado con FITC en el diagnóstico de leucemia mieloide aguda (AML) es 85%, que es 20% más alta que el examen morfológico tradicional {{6} en términos de la detección temprana de los tumores, el ajuste de los tumores de tumores, el ajuste de los tumores de tumores ajustados en forma de tumores de tumores de tumores de tumores de tumores de tumores de tumores tradicionales. (CTC) La tecnología de detección puede capturar células tumorales en concentraciones extremadamente bajas en sangre periférica, proporcionando un nuevo método para el diagnóstico temprano de tumores sólidos como el cáncer de mama y el cáncer de pulmón .
Diagnóstico de enfermedades autoinmunes
En la tecnología ELISA, se pueden utilizar autoanticuerpos marcados con FITC (como anticuerpos anti-nuclear y anticuerpos de ADN anti doble cadena) para el diagnóstico de enfermedades, como el lupus erythematoso (SLE) ., los experimentos han demostrado que FITC-selisA tiene una sensibilidad de 92% y una especificidad de 95% de detección detectante, lo que es más importante, lo que es más importante, lo que es más importante, que es más importante, que es una especificidad y una especificidad de 95% de detección de detección de detección de detección antibuerosa, lo que es más importante, lo que es más importante, que es más importante y una especificidad de 95% de detección de detección de detectar el 95% de detección, lo que es significativo. que los métodos de inmunofluorescencia tradicionales .
La permeabilidad celular y la baja toxicidad de FITC lo convierten en una herramienta ideal para la imagen celular, ampliamente utilizada en la localización de orgánulos, observación de la división celular e investigación de apoptosis .
Etiquetado de orgánulos celulares y observación dinámica
Las sondas mitocondriales etiquetadas por FITC (como Mitotracker Green) pueden unirse específicamente al potencial de la membrana mitocondrial y monitorear los cambios morfológicos mitocondriales en tiempo real . en la investigación neuronal, el desarrollo de microtúbulos de FITC marcó a los antibodios de microtúbulos}} puede mostrar la extensión dinámica del crecimiento de los axon, revelando el mecanismo de neuronal de la neuronal. Las sondas de lisosoma marcadas con FITC (LySotracker Green) también se pueden usar para estudiar procesos de autofagia, cuantificando el número de autofagosomas a través de cambios en la intensidad de fluorescencia .
Análisis de ciclo celular y apoptosis
En la citometría de flujo, el yoduro de propidio marcado con FITC (PI) puede unirse al ADN y distinguir las diferentes etapas del ciclo celular (g 0/g1, s, G2/M) por la intensidad de fluorescencia .} Los datos experimentales muestran que el método de tinción de doble tinción de TestPaC de FitC-PI es más que el método de tinción. Método de tinción azul . Además, las sondas de anexina V marcadas con FITC pueden unirse específicamente a la fosfatidilserina expuesta en la superficie de las células apoptóticas, logrando una identificación precisa de las células apoptóticas tempranas .
Investigación sobre migración celular e invasión
En los experimentos de Transwell, las células marcadas con FITC pueden monitorear el proceso de migración en tiempo real ., por ejemplo, en el estudio de la metástasis tumoral, la tasa de migración de las células de cáncer de mama marcadas con FITC (MCF -7) a través de la matriz de espejo se correlaciona positivamente con la capacidad de invasión, proporcionando indicadores cuantitativos para la detección de fármacos anti-tumores {4}
FITC juega múltiples roles en el desarrollo de fármacos, incluida la validación de objetivos, la evaluación del sistema de administración de fármacos y los estudios farmacocinéticos .
Validación objetivo y mecanismo de investigación de acción
Los inhibidores de la molécula pequeña etiquetada por FITC pueden usarse para validar los objetivos de fármacos ., por ejemplo, los inhibidores de EGFR marcados con FITC (como gefitinib) pueden demostrar la unión de fármacos a los receptores de EGFR en la superficie de las células tumorales, cuantificando la afinidad de unión (valor de KD) a través de la intensidad de fluorescencia {}}}}}}}, además, también se ajusta la afinidad de unión (el valor de KD) a través de la intensidad de la fluorescencia {}}}}}}}}. Estudie la eficiencia de silenciamiento del gen, proporcionando una base para la terapia de interferencia de ARN .
Evaluación del sistema de administración de medicamentos
Las nanopartículas marcadas con FITC (como liposomas y microesferas de polímeros) pueden monitorear el comportamiento de distribución y liberación de los fármacos in vivo en tiempo real .
Los experimentos han demostrado que la acumulación de liposomas PEGilados etiquetados con FITC en los tejidos tumorales es 2 . 8 veces que la de los medicamentos libres, y la señal de fluorescencia puede durar 24 horas, proporcionando datos visuales para optimizar los sistemas de administración de fármacos.
Estudios farmacocinéticos y toxicológicos
FITC labeled drug molecules can be quantitatively analyzed for their absorption, distribution, metabolism, and excretion (ADME) processes in vivo through fluorescence imaging technology. For example, the fluorescence intensity of FITC labeled antibiotics (such as vancomycin) in the kidneys is linearly related to drug concentration, providing a basis for optimizing drug Dosis . Además, los ensayos de citotoxicidad etiquetados por FITC también pueden evaluar el daño de los medicamentos a las células normales y guiar las evaluaciones de seguridad .
Las características de respuesta de fluorescencia de FITC hacen que sea única aplicable en el campo de la ciencia de los materiales, incluido el desarrollo de sensores de pH, sensores de temperatura y sondas de iones de metal .
Sensor de fluorescencia sensible al pH
La intensidad de fluorescencia deisotiocianato de fluoresceína is significantly affected by the pH value of the solution. In weakly acidic environments (pH 5.0-6.5), protonation of FITC groups leads to increased fluorescence intensity; Under alkaline conditions (pH>8 . 0), la fluorescencia se apaga . según esta característica, las nanopartículas modificadas FITC se pueden usar para monitorear las fluctuaciones de base ácida intracelular . Por ejemplo, la intensidad de la fluorescencia del complejo de biliribina de FITC en el tumor de la fluorescencia de tumor.
Sonda fluorescente sensible a la temperatura
La vida útil de la fluorescencia de FITC cambia con la temperatura . en condiciones de baja temperatura (4 grados), la vida útil de la fluorescencia de las microesferas de polímero marcadas con FITC se extiende a 5 . 2 nanosegundos, que es 1 . 8 veces más alta que la temperatura ambiente (25 grados). Esta característica lo convierte en una herramienta ideal para estudiar procesos de transición de fase y criopreservación celular.
Sonda de detección de iones de metal
FITC significantly reduces fluorescence intensity when combined with metal ions such as Cu ² ⁺ and Hg ² ⁺, making it suitable for environmental monitoring. For example, FITC modified silica gel nanoparticles have a detection limit of 0.1 nM for Hg ² ⁺ in water, which is 100 times higher than traditional atomic absorption spectroscopy.
La aplicación de FITC en el campo agrícola se está expandiendo gradualmente, incluida la detección del virus vegetal, el diagnóstico de enfermedades animales e identificación de pureza de variedades .
Detección rápida de virus vegetales
Los anticuerpos virales marcados con FITC con FITC se pueden usar para detectar el virus mosaico del tabaco (TMV), el virus de mosaico de pepino (cmv) y otros virus .} Los métodos . Además, las sondas de ácido nucleico marcado con FITC también se pueden usar para detectar genes exógenos en cultivos modificados genéticamente, como genes BT resistentes a los insectos.
Diagnóstico de enfermedades animales
Los anticuerpos marcados con FITC se pueden usar para detectar el virus de la fiebre porcina (CSFV), el virus de la influenza aviar (AIV) y otros virus .
En el diagnóstico de la fiebre porcina, los anticuerpos anti CSFV marcados con FITC se unen a las secciones de tejido y observan la distribución del virus a través de la microscopía de fluorescencia, reduciendo el tiempo de detección de los métodos tradicionales de 3 días a 6 horas . Además, la citometría de flujo marcada con FITC también se puede utilizar para detectar las células T específicas de patógeno en la sangre animal y evaluar la intensidad inmune de la intensidad inmune en la intensidad inmune de la intensidad inmune {3.
Identificación de pureza de variedades
FITC labeled DNA probes can be used to identify the purity of crop varieties. For example, the FITC probe targeting the rice blast disease resistance gene Pi ta can accurately distinguish between homozygotes and heterozygotes in hybrid rice seeds, with a purity identification accuracy of 99.5%. In addition, Los marcadores moleculares SSR marcados con FITC también se pueden utilizar para el análisis de diversidad genética de las razas de ganado y aves de corral, proporcionando una base científica para la reproducción.
Síntesis de fitC: 4- anhídrido nitroftálico (ver C8H3NO5, [5466-84-2]) reacciona con resorcinol en 195-200 Grado C para 10h, ciclanza en una mezcla de 3 'nitrofluoresceínas y 4' - nitrofluorescein, acetilates, acetética, acetética con la acetética con la acetética de la nitrofluesceína y 4 ' - nitrofluorescein, acetilates con la acetina, la actrillada con la acetética con la acetética 3' y 4 ' - nitrofluorescein, acetilates, acetética, acetética con la acetética de 3' ' hydrolyzes with saturated sodium hydroxide ethanol solution, 4 "nitrofluorescein is obtained. Then 4 '- nitrofluorescein is dissolved in ammonia water, reacted with nickel Rexhlet and hydrazine hydrate at room temperature for 2h, and reduced to 4' - amino fluorescein. The most radical is acylated and eliminado para obtenerisotiocianato de fluoresceína.
El producto FITC puro es polvo cristalino amarillo o naranja, que es fácilmente soluble en solvente de agua y alcohol . Hay dos isómeros, entre los cuales el isómero tipo I es mejor en eficiencia, estabilidad y unión de proteínas . El peso molecular de FitC es 389 . 4, la absorción de máxima longitud wavalggle es 490 nm ~ 495 nm, y el máximo de 495 nms, y el máximo de 495 nms, y el máximo de 495 n. La longitud de onda es de 520 ~ 530 nm, que muestra fluorescencia verde amarilla brillante . FITC se puede almacenar durante muchos años en lugares fríos, oscuros y secos, y es la fluoresceína más utilizada . su principal ventaja es que el ojo humano es más sensible al verde amarillo, y la fluorescencia verde en la especie de la sección es generalmente menos que el rojo.
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